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的手術刀。
1RNP:核糖核蛋白複合物。是嚮導RNA和Cas蛋白的複合體,嚮導RNA可以找到要剪的基因片段的位置,Cas蛋白可以把DNA剪斷。
2腺病毒:一種無外套膜的雙鏈DNA病毒,有很高的基因包裝能力,常作為基因編輯載體。
3CRISPR成簇的規律間隔的短迴文重複序列。將它配合上相關的核酸內切酶(簡稱Cas)就可以切割DNA。CRISPRCAS技術與鋅指核酸酶技術、“神話”核酸酶(TALEN)技術並稱基因編輯三大“剪刀”。
4脫靶:CRISPRCAS的識別序列通常是20個左右鹼基對,相對於生物的DNA很短,這種短鹼基片段在DNA長鏈中隨處可見。所以用它剪下DNA的時候,可能也同時剪掉了非靶標位點,造成各種亂七八糟的突變,導致細胞死亡。
其次,CRISPRCAS對錯誤的容忍度比較高,即便某一段鹼基片段與靶標片段不完全一致,也能發揮剪下作用,造成脫靶。總之,只要是剪錯了地方,就叫做脫靶。
再者,CAS發揮作用時,需要靶標基因的上游存在一個特定的短的鹼基序列,稱之為PAM序列(對於最廣泛使用的CRISPRCAS9,一般為NGG,其中N為任意一種鹼基)。如果實際操作中靶標基因片段上游到處都沒有PAM序列,則CRISPRCAS系統無法發揮剪下作用。這種情況也可以叫做脫靶。